目的 克隆构建绿色荧光蛋白(GFP)/Akt表达载体,观察其在鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达和定位,并探讨干细胞因子(SCF)通过PI3-Akt途径对转染pEGFP-C1/Akt的MSCs中c-kit、Akt和VEGF mRNA及蛋白表达的影响.方法 采用酶切法将Akt重组于GFP表达载体中,经酶切序列鉴定后,将该重组质粒GFP/Akt及GFP空质粒通过脂质体转染骨髓MSCs; 荧光显微镜观察其转染及在细胞中的分布; 分别采用Western blot 和反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测pEGFP-C1和pEGFP-C1/Akt转染MSCs后对c-kit、Akt 及VEGF mRNA和蛋白表达的影响,pEGFP-C1/Akt转染MSCs后不同浓度SCF对c-kit、Akt及VEGF mRNA和蛋白表达的影响. 结果 GFP/Akt基因表达载体经酶切鉴定和测序分析后确认构建成功,并在MSCs中表达.荧光显微镜下见pEGFP-C1转染后,绿色荧光均匀分布于整个细胞中; pEGFP-C1/Akt转染后,绿色荧光分布于细胞质中.与pEGFP-C1组相比较,pEGFP-C1/Akt转染组Akt及VEGF 的mRNA和蛋白表达均明显增强(P<0.05), c-kit mRNA和蛋白表达则无明显变化(P>0.05).加入SCF后其能增强实验组(SCF+pEGFP-C1/Akt)和对照组(SCF+pEGFP-C1)中c-kit、Akt及VEGF的 mRNA和蛋白表达,并且随着SCF的浓度增高该作用则越明显(P<0.05); 与对照组相比较,实验组c-kit mRNA和蛋白

作者：霍鑫；唐海燕；孔宏亮；刘英；张宏伟；王欣；胡新华；张强

来源：中国普外基础与临床杂志 2008 年 15卷 2期