目的 研制适合多黏菌素类抗生素耐药性编码基因检测用质粒DNA标准样品.方法 由National Center for Biotechnology Information(NCBI)数据库检索得到mcr-1、mcr-3、mcr-5基因参考序列,构建重组质粒和重组菌株;将重组菌传代至15代检测目标基因的遗传稳定性.提取重组质粒,真空干燥,制得标准样品.将标准样品水化、连续10倍梯度稀释,测定聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光PCR(RT-qPCR)扩增目标基因的检出限.随机抽取质粒DNA标准样品,采用PCR法和紫外分光光度计法检验样品的均匀性及其在4℃、37℃、-20℃的贮存稳定性.结果 成功获得多黏菌素类抗生素耐药机制编码基因mcr-1、mcr-3、mcr-5基因片段,重组菌15代传代中目的基因遗传稳定.mcr-1、mcr-3、mcr-5标准样品PCR和RT-qPCR最低检出限分别为1.67×104拷贝数/μL 和1.67拷贝数/μL、1.31×106拷贝数/μL和13.1拷贝数/μL、1.55×105拷贝数/μL和1.55拷贝数/μL.T检验表明,各基因随机抽取的12管标准样品质量间的F值均小于F临界值,且PCR均可检出,均匀性符合要求.标准样品在4℃贮存90d、37℃贮存14d、-20℃贮存360 d,定性、定量检验结果稳定、无极显著性差异.结论 本实验制备的mcr-1、mcr-3、mcr-5质粒DNA标准样品目的基因遗传稳定,均匀性和贮存稳定性良好.本研究结

作者：陈进；苏秀敏；杨静；曹彦卫；田园园；冯承谦；赵红阳；卢行安；崔生辉；杨保伟

来源：中国食品卫生杂志 2022 年 34卷 2期