目的:了解以慢病毒为载体的Smad4 siRNA转染小鼠急性钝挫伤骨骼肌的转染效率以及抑制骨骼肌纤维化、减轻疤痕生成、促进骨骼肌损伤修复的能力.方法:用自制打击装置将54只雌性C57b1小鼠(体重20~25g)右侧腓肠肌中段造成急性钝挫伤模型,随机分为①PBS对照组、②Smad4siRNA注射组、③scrambled siRNA注射组三组,每组18只.小鼠急性钝挫伤伤后10 d,分别在三组损伤部位注射PBS、Smad4 siRNA、scrambled siRNA各0.1ml.分别于伤后第28 d处死各组小鼠取材,荧光显微镜下观察局部绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)表达,在损伤部位取材骨骼肌组织行Real Time-PCR和Western blot方法检测Smad4基因和蛋白表达,Masson染色以及Vimentin免疫组化检测各组小鼠急性钝挫伤后腓肠肌局部纤维化及疤痕生成情况,生理学方法检测各组小鼠骨骼肌强直收缩和快速颤搐收缩能力,了解小鼠损伤骨骼肌愈合情况.结果:①scrambled siRNA注射组和Smad4 siRNA注射组小鼠损伤骨骼肌部位均可检测到GFP表达,Smad4 siRNA注射组肝脏组织内并未检测到GFP表达;②Smad4 siRNA注射组损伤部位骨骼肌Smad4基因和蛋白表达明显降低;③Smad4 siRNA注射组骨骼肌疤痕生成以及vimentin表达明显低于scrambled siRNA 注射组和PBS对照组;④Smad4 siRNA
作者:李宏云;陈疾忤;陈世益;陈始秋;张庆国
来源:中国运动医学杂志 2012 年 31卷 7期