目的 揭示肥胖诱发脂肪组织线粒体蛋白质组的变化,并探索变化的可能机制,实现针对小鼠脂肪组织线粒体蛋白质组的深度测序和准确定量.方法 利用数据依赖型(DDA)质谱方法鉴定小鼠白色脂肪组织和棕色脂肪组织中的线粒体蛋白;利用新型SWATH (sequential windowed acquisition of all theoretical mass spectra)质谱技术定量肥胖小鼠和野生型小鼠不同脂肪组织中线粒体蛋白,同时对表达差异的线粒体蛋白进行功能分析.实验步骤:①用组织线粒体提取试剂盒特异性提取不同类型脂肪组织线粒体蛋白;②用10％聚丙烯酰胺凝胶电泳预分离线粒体蛋白;③利用DDA方法建立线粒体蛋白质谱文库;④利用SWATH质谱方法定量线粒体蛋白;⑤利用Peak View2.0软件提取碎片离子色谱峰并进行积分计算其峰面积;⑥根据KEGG (kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路和GO(Gene Ontology)功能分类分析肥胖小鼠和正常小鼠脂肪组织表达差异蛋白的生物功能.结果 在白色脂肪组织和棕色脂肪组织分别准确鉴定并定量线粒体定位蛋白1000和1039种,3次生物学重复实验中共鉴定包括线粒体氨肟还原成分1在内的25种线粒体蛋白在白色脂肪组织特异性表达,包括非偶联蛋白3在内的21种线粒体蛋白在棕色脂肪组织特异性表达.肥胖小鼠与正常小鼠相比,白色脂肪组
作者：孙佳楠；段小涛；周泉；刘明伟；孙璐
来源：中国药理学与毒理学杂志 2015 年 29卷 3期
