目的:探讨RA-成纤维样滑膜细胞(FLS)中双特异性磷酸酶8(DUSP8)DUSP8与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)1之间的相互作用,及其对RA-FLSs增殖、凋亡的影响。方法:培养RA-FLS和正常FLS,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法检测两组细胞DUSP8 mRNA表达水平。采用细胞转染技术及RNA干扰技术,构建DUSP8过表达细胞系及DUSP8沉默细胞系。CCK-8法检测各组细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞凋亡。蛋白质印迹法检测各组细胞DUSP8、MAPK1、p-MAPK1、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验分析DUSP8与MAPK1的空间共定位,免疫共沉淀实验分析DUSP8与MAPK1蛋白之间是否存在相互作用。计量资料两组间比较采用独立样本
t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-
t检验。
结果:DUSP8在RA-FLS mRNA[(2.4±0.6)和(11.2±0.8),
t=21.63,
P<0.001]和蛋白表达[(0.24±0.04)和(0.74±0.08),
t=9.45,
P<0.001]水平均显著低于FLS。与空白对照组和过表达对照组相比,在RA-FLS细胞转染pcDNA3.1-Myc-DUSP8可显著抑制RA-FLS细胞的增殖[(90.5±5.6),(92.5±1.8),(56.4±4.4),
F=138.60,
P<0.001],增加细
作者:张锌;南鹤;李爽
来源:中华风湿病学杂志 2022 年 26卷 7期