目的:建立酶标仪法5α-还原酶抑制剂体外筛选模型. 方法:取6只雌性SD大鼠肝脏制备5α-还原酶,检测酶活性后,利用96孔板、酶标仪及酶标仪法分析软件建立5α-还原酶抑制剂体外筛选模型,并通过已知5α-还原酶抑制剂爱普列特及非那甾胺验证模型的可靠性.实验分别设置0、30、60 nmol/L爱普列特组及0、30、60 nmol/L非那甾胺组,96孔板依次加入终浓度0～40 μmol/L系列睾酮溶液、22 μmol/L的NADPH、终浓度0～60 nmol/L爱普列特或0～60 nmol/L非那甾胺及20μl 5α-还原酶,Tris-HCl缓冲液将每孔溶液体积调至200μl.将96孔板放置于酶标仪中,分别测定0、10 min的A340nm,并对读取数据进行分析. 结果:5α-还原酶的Km值为3.794 μmol/L,Vmax为0.271 μmol/(L· min)；爱普列特的酶抑制常数(Ki)为148.2 nmol/L,半数抑制浓度(IC50)为31.5 nmol/L,曲线图分析为反竞争性抑制剂；非那甾胺的Ki为158.8 nmol/L,IC50为13.6 nmol/L,曲线图分析为竞争性抑制剂；二者结果均同文献报道相同. 结论:建立的体外快速筛选模型能够有效地筛选5α-还原酶抑制剂.
作者：吴建辉；孙祖越
来源：中华男科学杂志 2013 年 19卷 6期
