目的:对2019新型冠状病毒(2019-novel Coronavirus，2019-nCoV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein，NP)进行原核表达、纯化与鉴定，并应用于2019-nCoV血清学诊断。方法:合成2019-nCoV NP基因，克隆至pET28a载体中，构建表达质粒，并进行诱导纯化。纯化蛋白经SDS-PAGE、间接ELISA、Western blot(WB)、免疫层析法进行鉴定。优化间接ELISA反应条件，进行血清抗体检测。结果:重组NP经镍柱纯化后SDS-PAGE电泳显示相对分子质量约50×10
3，与预期一致；间接ELISA、WB表明其能与2019-nCoV感染患者血清特异性结合；用免疫层析法发现对NP检测限为0.2 ng/ml；间接ELISA检测32份2019-nCoV感染者血清及对照血清，发现二者结果可见明显分群。
结论:原核表达的NP具有良好的免疫原性，可用于制备血清学诊断试剂。
作者：张黎；郑滨洋；缪连军；余秋凡；高行素；金路；李森；雍金贵；潘红星
来源：中华实验和临床病毒学杂志 2020 年 34卷 4期
