目的 明确结核分枝杆菌(MTB)异柠檬酸裂合酶(ICL)对耻垢分枝杆菌(MS)在巨噬细胞内存活的影响,并初步探讨其可能的机制.方法 构建MTB-icl基因的穿梭表达质粒pUV15-icl,电转化法导入MS中后检测MTB-ICL在MS中的表达.分别用rMS-pUV15-icl和rMS-pUV15感染鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,于感染一定时间后测定细胞内存活的细菌数,评价MTB-ICL对MS在巨噬细胞内存活的影响.分别留取上述两组巨噬细胞的培养上清液,检测干扰素γ(IFN-γ)和一氧化氮(NO)的水平,同时采用原位TUNEL技术检测两组巨噬细胞的凋亡水平,探讨MTB-ICL对MS在巨噬细胞内存活影响的可能机制.结果 RT-PCR、Western印迹和荧光显微镜检测结果证实MTB-ICL可在MS中有效表达.与rMS-pUV15比较,rMS-pUV15-icl在巨噬细胞内的存活率明显高(P＜0.01),感染后24 h和48 h,其菌落数分别为(32.78±2.90)×103和(23.33 ±2.34)×103,而rMS-pUV15菌落数分别为(14.67±2.45)×103和(2.28 ±0.25)×103.MTB-ICL对巨噬细胞产生IFN-γ和NO没有明显影响.原位凋亡检测结果显示,与rMS-pUV15感染组比较,rMS-pUV15-icl感染组巨噬细胞的凋亡水平明显下降.结论 MTB-ICL可促进MS在巨噬细胞内的存活,其机制之一可能是抑制宿主巨噬细胞的凋亡.
作者：李俊明；万腊根；朱道银；李娜；何永林；杨春
来源：中华医学杂志 2008 年 88卷 8期
