目的：构建及鉴定含有GST标签的结核分枝杆菌esat‐6基因的原核表达载体，并在大肠埃希菌中高效表达融合蛋白。方法 PCR扩增结核分枝杆菌 esat‐6基因，并构建到pGEX4T‐1上，重组质粒经测序鉴定后进行诱导表达，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析重组蛋白。结果扩增出了结核分枝杆菌 es at‐6基因，构建了具有正确基因序列的质粒载体pGEX4T‐1‐ESAT‐6，转化大肠埃希菌BL21后经诱导产生了高水平的表达产物，蛋白纯化后可被结核病患者血清特异性识别。结论构建了质粒载体pGEX4T‐1‐ESAT‐6，并经诱导后高效表达了ES A T‐6融合蛋白，为进一步研究结核菌的免疫机制奠定了基础。
作者：石洁；马晓光；李辉；邢进；闫国蕊；吴彩霞；靳晓伟
来源：中华医院感染学杂志 2015 年 3期
