背景与目的:构建TrKA特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对神经生长因子(NGF)促细胞增殖作用和对细胞周期的影响.材料与方法:通过Genbank提供的TrKA基因mRNA全序列,应用设计软件选择设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与PsilencerTM 4.1-CMV reo质粒载体连接,经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染乳腺癌MCF-7细胞.利用G418筛选稳定表达TrKA-siRNA的MCF-7细胞株,通过Real-time PCR、Western blot和免疫组化在mRNA和蛋白水平检测TrKA的表达水平.MTT法检测TrKA干扰后NGF对细胞增殖作用的影响.流式细胞术观察细胞周期的变化.结果:序列测定表明成功构建TrKA-siRNA表达载体,Real-time PER显示TrKA mRNA下调74.7
作者：陈昌杰；章菊；刘臣彪；杨清玲；滕凤猛；王惠
来源：癌变·畸变·突变 2009 年 21卷 1期
