目的克隆人血管内皮生长因子基因VEGF165片段,构建pcDNA3·1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病奠定基础. 方法从胎儿心肌组织中提取总RNA,应用RT-PCR方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,PCR法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his-B中,构建pcDNA3.1/hVEGF165重组体.用脂质体介导将其转染COS-7细胞,Western Blotting 方法检测rhVEGF165的表达蛋白. 结果 RT-PCR方法从胎儿心肌组织获得正确的hVEGF165基因序列,成功构建pcDNA3·1/hVEGF165且实现转染COS-7细胞的瞬时表达.结论该实验构建的pcDNA3·1/hVEGF165 转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白.
作者：周正春；陈兵；张胜权；罗欣；徐从贞；汪思应；葛建军
来源：安徽医科大学学报 2005 年 40卷 1期
