目的 建立起能够稳定表达 NLRC5 基因的肝癌HepG2细胞株. 方法 设计遗传霉素( G418 )的浓度梯度,通过对HepG2 细胞筛选最终确定筛选药物浓度. 将构建好的人源pEGFP-C2-NLRC5重组质粒利用脂质体介导法转染至HepG2肝癌细胞株中,用G418筛选出耐药阳性克隆. 通过免疫荧光技术观察绿色荧光蛋白稳定表达情况, Western blot法验证NLRC5蛋白表达情况. 结果 G418 在14 d内使HepG2细胞全部死亡的最小浓度是300 ng/ml. 用G418筛选瞬转pEGFP-C2-NLRC5 14 d在荧光显微镜下可见耐药克隆的形成. Western blot法检测显示,稳定过表达组 NL-RC5的蛋白水平比空质粒转染组高(t=15. 356,P<0. 05).结论 成功构建稳定表达NLRC5 基因的肝癌细胞株,为进一步研究NLRC5基因在肝癌的体内实验奠定了基础.
作者：何莺华；徐涛；倪明明；黄成；李娟；孟晓明；李俊
来源：安徽医科大学学报 2016 年 51卷 1期
