目的：构建 survivin 启动子调控的靶向 CD133基因的 siRNA 增殖型溶瘤腺病毒，研究其对肝癌细胞生长的影响。方法RT－PCR 法扩增 survivin 启动子，测序鉴定，双酶切连接，获得 pH－XC2－survivin。酶切 pH－XC2－survivin、pZD55－CD133－siRNA 获得 survivin 启动子表达框的亚克隆和CD133－siRNA 基因表达框的亚克隆，连接获得 survivin 启动子调控的 siRNA 增殖型溶瘤腺病毒表达载体质粒 pT－ZD55－CD133－siRNA。增殖型溶瘤腺病毒 survivin－T－ZD55－CD133－siRNA 经 PCR 和测序鉴定。 qRT－PCR 法检测 CD133表达， Western blot 法检测 E1A，CCK－8法检测细胞生长，流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建增殖型溶瘤腺病毒 sur－vivin－T－ZD55－CD133－siRNA。 qRT－PCR 法检测 CD133 mRNA明显下降， Western blot 证实 survivin－T－ZD55－CD133－siRNA在肿瘤细胞中表达 E1A 能抑制肝癌细胞 CD133表达及生长。结论构建的增殖型溶瘤腺病毒可有效降低肝癌细胞CD133的表达，用于肝癌基因治疗的进一步研究。
作者：牛坚；王月；刘斌；王人颢；朱志军；申海莲
来源：安徽医科大学学报 2016 年 51卷 7期
