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目的 探讨褪黑素(MT)对高糖刺激的小鼠肾小球系膜细胞(MCs)核因子-κB (NF-κB)与转化生长因子-β(TGF-β)/Smad3通路的影响.方法 将MCs分为甘露醇对照组、正常对照组、正常对照+ MT组、高糖组、高糖+不同浓度(10、100、1 000) μmol/L MT组.采用CCK-8检测MCs活性;5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)试剂盒检测MCs增殖情况;激光共聚焦法检测MCs NF-κBp65核转移及Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤连蛋白(Fn)表达情况;ELISA法检测细胞上清液中ColⅣ、Fn含量变化;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测ColⅣ、Fn mRNA表达水平;Western blot法检测ColⅣ、Fn、核因子κB抑制因子(IκB)、核因子κB抑制因子磷酸化(p-IκB)、TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白表达.结果 与正常对照组比较,高糖组MCs的增殖功能明显增强,同时MCs ColⅣ、Fn、p-IκB/IκB、NF-κBp65、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达均明显上调(P<0.05);与高糖组比较,高糖+不同浓度MT组各项指标呈浓度依赖性降低(P<0.05).结论 高糖可以增强MCs NF-κBp65核转移及TGF-β/Smad3信号通路的激活,导致细胞外基质ColⅣ和Fn分泌增加,MT能干预高糖刺激的MCs NF-κBp65核转移,并且抑制TGF-β/Smad3信号通路的激活,降低纤维化因子的释放.

作者:马玉;杨雯雯;范哲;吴永贵;夏玲玲

来源:安徽医科大学学报 2019 年 54卷 6期

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作者:
马玉;杨雯雯;范哲;吴永贵;夏玲玲
来源:
安徽医科大学学报 2019 年 54卷 6期
标签:
褪黑素 糖尿病肾病 肾小球系膜细胞 纤维化
目的 探讨褪黑素(MT)对高糖刺激的小鼠肾小球系膜细胞(MCs)核因子-κB (NF-κB)与转化生长因子-β(TGF-β)/Smad3通路的影响.方法 将MCs分为甘露醇对照组、正常对照组、正常对照+ MT组、高糖组、高糖+不同浓度(10、100、1 000) μmol/L MT组.采用CCK-8检测MCs活性;5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)试剂盒检测MCs增殖情况;激光共聚焦法检测MCs NF-κBp65核转移及Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤连蛋白(Fn)表达情况;ELISA法检测细胞上清液中ColⅣ、Fn含量变化;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测ColⅣ、Fn mRNA表达水平;Western blot法检测ColⅣ、Fn、核因子κB抑制因子(IκB)、核因子κB抑制因子磷酸化(p-IκB)、TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白表达.结果 与正常对照组比较,高糖组MCs的增殖功能明显增强,同时MCs ColⅣ、Fn、p-IκB/IκB、NF-κBp65、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达均明显上调(P<0.05);与高糖组比较,高糖+不同浓度MT组各项指标呈浓度依赖性降低(P<0.05).结论 高糖可以增强MCs NF-κBp65核转移及TGF-β/Smad3信号通路的激活,导致细胞外基质ColⅣ和Fn分泌增加,MT能干预高糖刺激的MCs NF-κBp65核转移,并且抑制TGF-β/Smad3信号通路的激活,降低纤维化因子的释放.