目的：构建弓形虫Chinese 1基因型TgCtWh3（以后均简称Wh3）株棒状体蛋白（ rhoptry protein ，ROPs）16的原核和真核重组表达质粒及其3D结构。方法参照ROP16序列分别设计引物，采用PCR从弓形虫Chinese 1基因型Wh3株基因组DNA中扩增出编码ROP16的基因片段，克隆至pMD18-T载体；经PCR及测序分析鉴定；阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C2，分别转化大肠杆菌BL21和DH5α，PCR和酶切鉴定转化菌落插入的序列；将构建的原核表达菌株经IPTG诱导，SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达；将构建的真核重组质粒经脂质体转染293T细胞，观察其在细胞中表达；采用生物信息学方法分析构建了蛋白的3 D结构。结果各组均PCR扩增出约2．1 kb ROP16基因的特异片段，序列检测结果均正确；分别亚克隆到原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C2中，成功构建了Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的原核表达质粒和真核表达质粒；原核表达质粒在大肠杆菌中表达了ROP16的融合蛋白；真核表达质粒在293T细胞中成功表达，成功构建出ROP16基因的3D结构图。结论以pET-28a和pEGFP-C2为载体，分别成功构建并表达了ROP16的原核和真核重组质粒，并构建出其3D结构图。
作者：唐媛媛；莫绪维；陈鹤；李群；蔡亦红；沈继龙
来源：安徽医药 2015 年 4期
