目的探讨GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达．方法高压水动力尾静脉注射pCMV-tag2B空载质粒的12只小鼠为对照组，注射pCMV-tag2B-HBx质粒的12只小鼠为观察组．采用Elisa法检测IFN-γ表达；采用免疫组化法检测小鼠肝脏中MIG，IP-10表达；扩增MIG，IP-10基因至pET42a，构建载体后行IPTG诱导表达；采用PAGE和Western blot法鉴定蛋白表达；采用GST柱纯化表达蛋白。结果对照组小鼠肝脏中无MIG，IP-10表达，观察组小鼠肝脏中有MIG，IP-10表达；观察组小鼠肝脏中IFN-γ表达升高21．4％，对照组降低了54．1％，与小鼠肝脏中MIG，IP-10表达一致；MIG基因条带为330 bp，IP-10基因条带为246 bp，经重组质粒测序模版检测，并与Blast进行对比，测序结果与目的基因一致；未诱导组无蛋白表达，pET42a空载IPTG诱导仅有GST表达（26 kD），pET42a-mMIG，pET42a-mIP-10重组质粒IPTG诱导有mMIG，mIP-10表达；25℃下，IPTG质量浓度为0．2 mmol/L，转速为150 r/min，GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白含量最高；上清经15％SDS-PAGE检测可提高目的蛋白纯度；采用Western blot检测融合蛋白，经GST柱纯化后可见融合蛋白条带．结论 GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体可成功构建，具有高效表达特征，为制备抗体提供了

作者：德吉央宗；李勇

来源：北华大学学报（自然科学版） 2013 年 4期