目的:研究自噬在顺铂引起膀胱癌细胞凋亡中的作用.方法:以膀胱癌细胞T24为细胞模型,利用透射电镜观察自噬泡形成,荧光显微镜观察转染绿色荧光蛋白和微管相关蛋白1轻链3融合蛋白(green fluorescent protein and microtubule associated protein 1 light chain 3 fusion protein,GFP-LC3)的质粒的荧光聚集情况.应用蛋白质免疫印迹检测LC3-Ⅱ的积累,检测顺铂能否诱导膀胱癌T24细胞发生自噬.此外,蛋白质免疫印迹还被用来检测自噬相关信号通路哺乳动物雷帕霉素受体(mammal target of rapamycin,mTOR)及其下游相对分子质量70 000的核糖体蛋白质S6激酶(70 000 ribosomal protein S6 kinase,P-70S6K)的变化,以及凋亡标志蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的切割,之后利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H-四唑盐复合物检测法[3-(4,5-dimethyhhiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt,MTS]观察在自噬促进剂雷帕霉素(rapamycin)存在与否的情况下顺铂引起的膀胱癌细胞活力变化.本实验还使用了RNA干扰技术敲降LC3表达.结果:电子显微镜显示相比对照组,顺铂可以引起膀胱癌细胞出现大量自噬泡.荧光显微镜观察GFP-LC3聚集程度,

作者：杨轩；袁栋栋；姜学军；席志军

来源：北京大学学报（医学版） 2013 年 45卷 2期