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目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶(ILK)表达变化的关系.方法 体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/ml TGF-β1处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1(0.1、1.0、10、100 ng/ml)处理细胞,或以同一浓度的MCP-1(1 ng/ml)在不同时间点(0h、12h、24h、36h、48h、72h)处理细胞.用半定量RT-PCR方法测定各组HKC细胞α-SMA mRNA的表达,Western blot方法测定各组HKC细胞α-SMA及ILK表达.在上述实验基础上进一步观察MEK抑制剂(PD98059,10μmol/L),p38 MAPK抑制剂(SB203580,5μmol/L)和ROCK抑制剂(Y27632,500μmol/L)对HKC细胞ILK表达的影响.结果 MCP-1(0.1、1.0ng/ml)作用后HKC细胞α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达显著高于阴性对照组(P<0.01),但低于阳性对照组(P<0.01);其中以1.0ng/ml MCP-1组作用后α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达水平增高更为显著(P<0.001).1.0ng/ml MCP-1作用后细胞α-SMA mR-NA和α-SMA、ILK蛋白表达在0~48h内逐渐增加,48h达最高峰(P<0.01),72h时呈下降趋势.分别加入阻断剂PD98059、SB203580和Y27632后,HKC细胞ILK蛋白表达水平与MCP-1单独作用无显著性差异(P>0.05).结论 MCP-1可诱导肾小管上皮细胞转分化并

作者:赵班;李慧凛;连耀国;吴华;郑法雷

来源:北京医学 2009 年 31卷 3期

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作者:
赵班;李慧凛;连耀国;吴华;郑法雷
来源:
北京医学 2009 年 31卷 3期
标签:
肾小管上皮-间充质细胞转化 转化生长因子-β1 α-平滑肌肌动蛋白 单核细胞趋化因子-1 整合素连接激酶
目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶(ILK)表达变化的关系.方法 体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/ml TGF-β1处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1(0.1、1.0、10、100 ng/ml)处理细胞,或以同一浓度的MCP-1(1 ng/ml)在不同时间点(0h、12h、24h、36h、48h、72h)处理细胞.用半定量RT-PCR方法测定各组HKC细胞α-SMA mRNA的表达,Western blot方法测定各组HKC细胞α-SMA及ILK表达.在上述实验基础上进一步观察MEK抑制剂(PD98059,10μmol/L),p38 MAPK抑制剂(SB203580,5μmol/L)和ROCK抑制剂(Y27632,500μmol/L)对HKC细胞ILK表达的影响.结果 MCP-1(0.1、1.0ng/ml)作用后HKC细胞α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达显著高于阴性对照组(P<0.01),但低于阳性对照组(P<0.01);其中以1.0ng/ml MCP-1组作用后α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达水平增高更为显著(P<0.001).1.0ng/ml MCP-1作用后细胞α-SMA mR-NA和α-SMA、ILK蛋白表达在0~48h内逐渐增加,48h达最高峰(P<0.01),72h时呈下降趋势.分别加入阻断剂PD98059、SB203580和Y27632后,HKC细胞ILK蛋白表达水平与MCP-1单独作用无显著性差异(P>0.05).结论 MCP-1可诱导肾小管上皮细胞转分化并