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目的 观察整合素连接激酶(ILK)在缺氧晶状体上皮细胞(HLECs)中的表达变化及其对细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法 体外培养HLEC-B3,以不同浓度CoCl2培养液进行干预,CCK-8法筛选最佳的CoCl2作用浓度.以100μmol/L的CoCl2作用于HLECs建立缺氧模型,分别于缺氧0、6、12、24、48 h时以Western blotting法检测HLECs中的ILK.将HLECs分为CoCl2组、ILK抑制剂组、对照组,其中CoCl2组和ILK抑制剂组加入100μmol/L的CoCl2制作缺氧模型,ILK抑制剂组用ILK特异性抑制剂QLT0267(10 nmol/L)预处理1 h,对照组常规培养.三组继续培养24 h后采用Western blotting法检测细胞中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN),采用实时荧光定量PCR法检测α-SMA、FN mRNA.结果 缺氧6、12、24、48 h时ILK蛋白相对表达量均增高,其中缺氧12、24 h时ILK蛋白相对表达量高于缺氧6、48 h时(P均<0.05).CoCl2组细胞中α-SMA、FN蛋白相对表达量高于对照组,ILK抑制剂组细胞中α-SMA、FN蛋白相对表达量低于CoCl2组(P均<0.01).CoCl2组细胞中α-SMA、FN mRNA相对表达量高于对照组,ILK抑制剂组细胞中α-SMA、FN mRNA相对表达量低于CoCl2组(P均<0.01).结论 CoCl2诱导的缺氧HLECs中ILK表达增高;抑制ILK表达后,HLECs中EMT标志蛋白表达下调,EMT过

作者:朱艳;朱玉广;曹智;滕兴波;孙海霞;刘宪金;杨伟舟

来源:山东医药 2019 年 59卷 8期

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作者:
朱艳;朱玉广;曹智;滕兴波;孙海霞;刘宪金;杨伟舟
来源:
山东医药 2019 年 59卷 8期
标签:
整合素连接激酶 晶状体上皮细胞 上皮-间充质转化 α-平滑肌肌动蛋白 纤维连接蛋白 氯化钴
目的 观察整合素连接激酶(ILK)在缺氧晶状体上皮细胞(HLECs)中的表达变化及其对细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法 体外培养HLEC-B3,以不同浓度CoCl2培养液进行干预,CCK-8法筛选最佳的CoCl2作用浓度.以100μmol/L的CoCl2作用于HLECs建立缺氧模型,分别于缺氧0、6、12、24、48 h时以Western blotting法检测HLECs中的ILK.将HLECs分为CoCl2组、ILK抑制剂组、对照组,其中CoCl2组和ILK抑制剂组加入100μmol/L的CoCl2制作缺氧模型,ILK抑制剂组用ILK特异性抑制剂QLT0267(10 nmol/L)预处理1 h,对照组常规培养.三组继续培养24 h后采用Western blotting法检测细胞中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN),采用实时荧光定量PCR法检测α-SMA、FN mRNA.结果 缺氧6、12、24、48 h时ILK蛋白相对表达量均增高,其中缺氧12、24 h时ILK蛋白相对表达量高于缺氧6、48 h时(P均<0.05).CoCl2组细胞中α-SMA、FN蛋白相对表达量高于对照组,ILK抑制剂组细胞中α-SMA、FN蛋白相对表达量低于CoCl2组(P均<0.01).CoCl2组细胞中α-SMA、FN mRNA相对表达量高于对照组,ILK抑制剂组细胞中α-SMA、FN mRNA相对表达量低于CoCl2组(P均<0.01).结论 CoCl2诱导的缺氧HLECs中ILK表达增高;抑制ILK表达后,HLECs中EMT标志蛋白表达下调,EMT过