目的:观察HBV S区和C区特异性的小发夹RNA(shRNA)表达载体对HepG2.2.15细胞中HBV复制和表达的影响.方法:采用含有pol Ⅲ启动子的真核表达载体pSilenceCircle-U6构建针对HBV S区和C区的特异性shRNA表达质粒SC-S和SC-C.实验设立SC-S组、SC-C组、无关对照SC-N组和空白对照组,采用不同浓度的重组载体转染HepG2.2.15细胞,并作用不同时间.应用ELISA方法检测细胞上清液中的HBeAg和HBsAg,用斑点杂交方法检测细胞上清中的HBV DNA.结果:成功构建了含目的序列的重组质粒SC-S和SC-C.SC-S对HBeAg和HBsAg表达的抑制率明显高于SC-C;随着给药浓度的增加,SC-S对HBeAg和HBsAg表达的抑制率逐渐增强;SC-S转染HepG2.2.15细胞后第3天产生明显抑制效应,对HBeAg及HBsAg表达的抑制率在第6天达高峰,第9天抑制率仍较高.斑点杂交结果显示,SC-S对HBV复制的抑制效应强于SC-C.结论:构建的HBV S区和C区特异性shRNA表达质粒有明显、高效抑制HBV复制和表达的作用.
作者：汪杨；牛俊奇；王峰
来源：吉林大学学报（医学版） 2007 年 33卷 4期
