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目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化中的作用,并探讨其可能的分子机制.方法:体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,10 μg·L-1 TGF-β1作用1、2和6h(分别为TGF-β1 1 h组、TGF-β1 2 h组和TGF-β1 6 h组),并设对照组(不加TGF-β1),RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smurf1和Smurf2 mRNA和蛋白的表达水平.MRC-5细胞随机分为对照组(未加入TGF-β1或siRNA)、TGF-β1组(10 μg·L-1 TGF-β1)、Control siRNA转染组(10 μg·L-1 TGF-β1+Control siRNA)和Smurf2 siRNA转染组(10 μg·L-1 TGF-β1+ Smurf2 siRNA).Western blotting法检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原a1 (COL1A1)的表达水平;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-β Ⅰ型受体(TβR Ⅰ)、Smad2和Smad3 mRNA和蛋白的表达水平.结果:与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且随着TGF-β1作用时间的延长,其表达水平呈逐渐增加的趋势;与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf1表达水平无明显变化(P>0.05).与TGF-β1组比较,Smurf2 siRNA组细胞中Smurf2蛋白表达水平下降(P<0.05).与对照组

作者:杨俊侠;曹述任;张敏

来源:吉林大学学报(医学版) 2015 年 41卷 5期

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杨俊侠;曹述任;张敏
来源:
吉林大学学报(医学版) 2015 年 41卷 5期
标签:
Smurf2 肺成纤维细胞 转化生长因子β1 信号转导 Smad ubiquitination regulatory factor 2 lung fibroblast transforming growth factor-β1 signal transduction
目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化中的作用,并探讨其可能的分子机制.方法:体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,10 μg·L-1 TGF-β1作用1、2和6h(分别为TGF-β1 1 h组、TGF-β1 2 h组和TGF-β1 6 h组),并设对照组(不加TGF-β1),RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smurf1和Smurf2 mRNA和蛋白的表达水平.MRC-5细胞随机分为对照组(未加入TGF-β1或siRNA)、TGF-β1组(10 μg·L-1 TGF-β1)、Control siRNA转染组(10 μg·L-1 TGF-β1+Control siRNA)和Smurf2 siRNA转染组(10 μg·L-1 TGF-β1+ Smurf2 siRNA).Western blotting法检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原a1 (COL1A1)的表达水平;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-β Ⅰ型受体(TβR Ⅰ)、Smad2和Smad3 mRNA和蛋白的表达水平.结果:与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且随着TGF-β1作用时间的延长,其表达水平呈逐渐增加的趋势;与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf1表达水平无明显变化(P>0.05).与TGF-β1组比较,Smurf2 siRNA组细胞中Smurf2蛋白表达水平下降(P<0.05).与对照组