目的:克隆结核分枝杆菌mtb8.4/hIL12嵌合基因,构建其真核表达质粒,并进行鉴定.方法:采用基因工程技术,首先以pcDNA 3.1(+)-mtb 8.4为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增出mtb 8.4-linker基因,与pCI-neo载体进行连接重组,构建成pCI-neo-mtb 8.4-linker(pML)重组质粒,然后以pORF-hIL12质粒为模板,经PCR扩增出hIL-12基因,将hIL-12基因与pML质粒进行连接重组,构建成mtb 8.4/hIL12嵌合基因真核表达质粒,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定.结果:mtb 8.4/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功.结论:mtb 8.4/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病mtb 8.4/hIL12嵌合基因疫苗奠定了基础.
作者：李晖；任小华；钟森；任红
来源：重庆医科大学学报 2004 年 29卷 5期
