目的:构建克隆结核分枝杆菌Mtb8.4/hIL12嵌合基因疫苗,并在COS-7细胞中表达,研究该疫苗的免疫原性.方法:克隆Mtb8.4/hIL12嵌合基因,并导入真核表达载体pCI-neo中,构建pCI-neo-Mtb8.4/hIL12重组真核质粒.用限制性内切酶消化、 PCR及DNA序列测定等鉴定后,转染COS-7细胞,用RT-PCR和Western blot鉴定Mtb8.4/hIL12嵌合基因在转录水平的表达.用Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗免疫C57BL/6N小鼠,收集脾细胞培养上清检测细胞因子的水平,并用乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定细胞毒性T细胞(CTL)的杀伤作用.结果:pCI-neo-Mtb8.4/hIL12重组质粒构建成功.以其转染COS-7细胞后,Mtb8.4/hIL12嵌合基因在转录水平获得表达.Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,IFN-γ和IL-2的分泌增加,IL- 4的分泌减少,特异性CTL的杀伤活性增强.结论:成功地构建pCI-neo-Mtb8.4/hIL12重组质粒,并在COS-7细胞中表达.构建的Mtb8.4/hIL12基因疫苗具有较强的免疫原性,可明显诱导CTL的杀伤活性.
作者：李晖；李榕；钟森；罗月贝；任红；邓存良
来源：细胞与分子免疫学杂志 2006 年 22卷 5期
