目的:用真核转录载体pSilencer2.0构建针对survivin基因的重组真核转录载体,并转染膀胱肿瘤细胞系EJ,通过RNA干扰(RNAi)阻断EJ细胞中survivin基因的表达.方法:将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与psilencer2.0线性质粒以T4DNA连接酶连接,重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果.结果:酶切及测序证实设计合成的DNA已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹检测实验表明:pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体有效地阻断了EJ细胞中survivin基因的表达,survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.01),其中pSilencer2.0-SVV2重组载体干扰效果更佳.结论:成功构建了针对survivin基因的真核转录载体pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2,两者均可有效地阻断膀胱癌细胞系EJ细胞中survivin基因的表达,pSilencer2.0-SVV2重组载体效果更佳,这为后继实验研究打下基础.
作者：杨华安；苟欣；吴跃；郑传东
来源：重庆医科大学学报 2008 年 33卷 1期
