目的:克隆人端粒酶逆转录酶启动子(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT),探讨对乳腺癌细胞的特异性[1],利用RNAi技术靶向沉默耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR乳腺癌耐药蛋白(Breast cancer resistance protein,BCRP)基因[2]的表达,观察BCRP的mRNA变化,BCRP蛋白的表达以及对阿霉素耐药性的变化[3].方法:构建重组质粒(pGenesil-CMV-shRNA、pGenesil-hTERT-shRNA),分别转染端粒酶阴性及阳性细胞,检测hTERT启动子的靶向性,应用RT-PCR及Western-blot技术检测不同组的细胞的RNA、蛋白差异,MTY法分析药敏性变化[4].结果:端粒酶阳性的细胞可见很强的荧光,明显强于端粒酶阴性的细胞[5];细胞实验RT-PCR及Western blot检测结果显示:BCRP的mRNA和蛋白的表达受抑制与对照组其差异有显著性(P<0.05);MTT比色法结果显示:对阿霉素的药物敏感性明显提高.结论:使用hTERT启动子联合RNAi成功靶向沉默BCRP基因,乳腺癌MCF-7/ADR对阿霉素的敏感性明显增加,为进一步开发肿瘤的特异性基因沉默治疗奠定实验基础.
作者：黄金向；王继见；莫琳君
来源：重庆医科大学学报 2010 年 35卷 10期
