目的:本研究拟采用蛋白原核表达的方法,诱导表达人Api6(Apoptosis inhibitor 6)融合蛋白,为进一步研究Api6在凋亡抑制、脂质代谢和肿瘤发生中的作用奠定基础.方法:利用PCR技术扩增人Api6基因,将其克隆至原核表达载体ppSUMO,构建重组质粒ppSUMO-Api6;重组质粒转化原核表达宿主菌E.coli Rosetta感受态;采用蛋白原核表达的方法,不同诱导前菌液浓度,不同温度、不同异丙基硫化半乳糖苷(Isopropy 1-β-D-thiogalaotopyrano-side,IPTG)浓度、不同诱导时间,筛选诱导表达Api6重组蛋白的最优条件;Western blot鉴定其表达情况.结果:成功构建重组质粒ppSUMO-Api6;成功诱导Api6重组蛋白的原核表达,表达的最优条件为:OD600=0.5～0.8的重组菌,16℃、0.5 mmol/L IPTG诱导16 h.结论:含有人Api6 cDNA全长序列的重组质粒ppSUMO-Api6,经转化原核表达宿主菌E.coli Rosetta感受态细胞,在诱导前菌液OD600=0.5～0.8、16℃、0.5 mmol/LIPTG、诱导16h这一优化的诱导条件下,重组菌ppSUMO-Api6-Rosetta可诱导重组蛋白ppSUMO-Api6的原核表达.
作者：方严；练雪梅
来源：重庆医科大学学报 2011 年 36卷 9期
