目的：建立检测人AnnexinⅡmRNA水平的SYBR Green实时荧光定量PCR方法，并用其测定人乳腺癌细胞MDA-MB-231和 MCF-7中AnnexinⅡmRNA水平。方法根据人AnnexinⅡ mRNA的保守序列设计特异性引物，提取人乳腺癌细胞总 RNA，并逆转录为cDNA，胶回收纯化PCR产物，并与pGM-T载体连接构建质粒标准品，进一步通过SYBR Green实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞中 Annexin ⅡmRNA水平。结果该方法标准曲线的r2为0．997，融解曲线分析显示单个峰，pGM-T AnnexinⅡ质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6．2％、7．8％（高拷贝）和9．1％、12．3％（低拷贝）。进一步研究表明人乳腺癌细胞 MDA-MB-231中 AnnexinⅡmRNA水平显著高于 MCF-7细胞（P＜0．01）。结论建立的检测人 AnnexinⅡmRNA水平的 SYBR Green实时荧光定量PCR方法特异性、重复性好，可用于人乳腺癌细胞中 AnnexinⅡ mRNA的定量检测。
作者：郭变琴；黄学梅；吴立翔
来源：重庆医学 2014 年 18期
