目的：探索凝血酶合并缺氧对PC12细胞损伤的最佳反应时间点，为进一步研究凝血酶在缺血性脑损伤中的意义提供实验方法。方法建立体外缺氧合并凝血酶诱导的PC12细胞损伤模型。按照常规细胞培养方法，采用三气培养箱（1％ O2，5％ CO2，94％ N2）和无糖DM EM培养液造成细胞缺氧模拟缺血，并同时加入不同浓度的凝血酶（0、50、100、150和200 U／mL ），再将每组都作用于1、6、12、24 h后，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）分析细胞的存活率、TUNEL法检测细胞的凋亡程度。结果随着缺氧时间的延长和凝血酶浓度的增加，细胞存活率逐渐下降，TUNEL细胞阳性率和凋亡率逐渐升高。低浓度凝血酶（50 U／mL）在缺氧1 h后，与对照组（0 U／mL）相比细胞存活率有所升高，提示低凝血酶可能有保护作用。尤以缺氧12 h后开始细胞损伤更为明显，150 U／m L凝血酶组作用12 h后与对照组相比细胞存活率显著下降（ P＜0．01），凋亡率显著增加（ P＜0．05）；且200 U／mL凝血酶作用12 h和150、200 U／mL 凝血酶组作用24 h后细胞存活率与对照组比较差异均有统计学意义（ P＜0．05）。结论150 U／mL凝血酶在缺氧作用12 h后为研究凝血酶合并缺氧对PC12细胞损伤的最佳模型条件。
作者：覃弘宇；李银；李定祥；邓奕辉
来源：重庆医学 2016 年 45卷 27期
