目的 探究血管内皮生长因子165(VEGF165)、骨形态发生蛋白(BMP2)双基因转染SD大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)及其基因表达与体外成骨能力.方法 提取SD大鼠胫骨骨髓,原代培养获得BMSCs并进行流式细胞学鉴定.通过脂质体(Lipofect-amine2000)介导VEGF165、BMP2基因转染SD大鼠BMSCs,并分为pIRES-hBMP2-hVEGF165转染组(双基因转染)、pIRES-hBMP2转染组(单基因转染)、pIRES-hVEGF165转染组(单基因转染)、空载转染组(空白对照).采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、酶联免疫吸附试验、组织学染色方法评估基因转染BMSCs的增殖情况、基因表达及体外成骨能力.结果 流式细胞鉴定培养的BMSCs表面Marker示CD44和CD90标志物阳性,CD34和CD45标志物为阴性,证实成功获取大鼠BMSCs.通过荧光显微镜观察各转染组BMSCs,24 h后可见绿色荧光发出,表明转染成功.MTT结果显示:随着时间的延长,各转染组BMSCs细胞的数量呈上升趋势,与未转染BMSCs的相比,细胞数量峰值无明显差异,证实转染后BMSCs生长情况良好.ELISA染色结果显示:pIRES-hBMP2-hVEGF165转染组BMP2蛋白及VEGF165蛋白水平较pIRES-hBMP2转染组和pIRES-hVEGF165转染组及空载转染组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).组织学染色观察发现pIRES-hBMP2-hVEGF165转染组细胞碱性

作者：温洋；陈丽媛；沈师；卓乃强

来源：重庆医学 2020 年 49卷 20期