目的:探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法.方法:应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体(Anti-Fab)与链球菌蛋白G亲和胶(Gamma Bind)交联制备亲和层析柱,用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗HBs单克隆Fab片段.经依沙吖啶沉淀、离子交换、分子筛纯化人混合血清提取IgG组分,木瓜酶处理后分离、纯化出Fab,免疫绵羊制备高效价抗血清.用Gamma Bind一步纯化出抗血清中的IgG组分,再将该IgG经交联剂与Gamma Bind交联后制成亲和胶.人源抗HBs阳性菌培养上清与亲和胶共育后装柱,PBS洗去非特异结合蛋白,再用5 mol/L氯化锂洗脱特异Fab.结果:聚丙烯酰胺电泳纯化产物显示,纯化后的抗体片段在电泳中形成单一区带,达到电泳纯;用酶标抗Fab抗体免疫印迹结果证明,电泳显示的单一区带为Fab蛋白区带;抗原特异Dotblot检测表明,该法制备出的Fab保持了抗原结合活性.结论:本实验建立的一步亲和纯化法具操作简便、纯化快速和高效的特点,是人源性单克隆抗体Fab片段纯化的较佳方法.
作者：胡栋平；韩焕兴；尤长宣；罗荣城；毛庆民
来源：第二军医大学学报 2000 年 21卷 1期
