目的:获得血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)全长编码基因并在GST原核表达系统中表达.方法:通过RT-PCR方法,从正常人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出PAF-AH全长编码基因,将其克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-3,转化大肠杆菌BL21并诱导表达,采用GST蛋白纯化系统进行纯化.所得纯化蛋白以SDS-PAGE及Western印迹方法鉴定,并进行酶活性测定.结果:获得了PAF-AH基因,序列分析与GenBank数据库中序列一致.SDS-PAGE及Westem印迹结果显示,诱导表达出可溶性的融合蛋白,其相对分子质量与预期相符.纯化蛋白经Western印迹检测能够被特异性抗体所识别,具有免疫学活性;酶活性检测证实其具有特异的水解PAF的活性.结论:本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的PAF-AH蛋白.
作者：邹颖；毕新岭；顾军；缪明永；王梁华；时多
来源：第二军医大学学报 2007 年 28卷 5期
