目的 筛选出TLR7 TIR区对其信号传递起关键作用的位点,并解释该位点的作用机制.方法 针对TLR7野生型序列,设计构建一系列TLR7缺失突变与点突变质粒.将这些质粒转染入HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测这些质粒对NF-κB信号通路的影响.利用免疫共沉淀与蛋白质印迹实验验证TLR7突变体与其下游接头蛋白MyD88结合能力的变化.结果 通过对TLR7胞内区截短突变分析,发现在其TIR区存在一个由16个氨基酸残基组成的区域对其信号传递至关重要.进一步的研究发现,该区域存在一个RXR信号基序.该基序位于1004位与1006位的两个保守精氨酸残基,为TLR7正常信号传递所必需.通过免疫共沉淀与蛋白质印迹实验,可以发现TLR7位于1004位的精氨酸对其与下游蛋白MyD88的结合至关重要.结论 成功鉴定出TLR7 TIR区1004位的精氨酸对其信号传递起重要作用,该位点是通过影响TLR7与MyD88结合的方式发挥功能.
作者：魏伟；章意亮；郭瀛军；孙树汉
来源：第二军医大学学报 2012 年 33卷 3期
