目的 研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肝癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响并探讨其分子机制.方法 用TNF-a处理人肝癌细胞株(Hep3B和SMMC-7721)24 h,倒置显微镜下观察处理前后细胞形态的变化,采用荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹分析方法检测细胞中上皮细胞标记物上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)和β-连环素(β-catenin)、间质细胞标记物波形蛋白(Vimentin)和神经性钙黏蛋白(N-cadherin)以及转录调控因子Twist的表达变化,Transwell及划痕实验分析细胞的侵袭能力.随后采用荧光素酶报告基因系统和细胞免疫荧光评估TNF-α对核因子κB(NF-κB)的激活作用；蛋白质印迹分析检测IκBd及p-IκBα蛋白表达水平.TNF-α联合应用NF-κB抑制剂后,检测细胞EMT表型变化.结果 Hep3B和SMMC-7721细胞用TNF-α处理后,表现EMT的表型；细胞的划痕愈合率明显大于未处理组(P＜0.05),Transwell实验显示细胞穿透膜的数量亦显著增多(P＜0.05).TNF-α能有效激活NF-κB报告基因,促进NF-κB p65核转位及IκBα的磷酸化.应用NF-κB抑制剂BAY11-7082能够逆转TNF-α诱导EMT的作用(P＜0.05).结论 TNF-α通过NF-κB依赖性途径诱导肝癌细胞发生EMT,进而促进肝癌的侵袭转移.
作者：寇兴瑞；井莹莹；喻国锋；吴孟超；卫立辛
来源：第二军医大学学报 2013 年 34卷 3期
