目的构建正义和反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并分别转染人低转移肝癌细胞株MHCC97-L及高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM6.方法采用基因重组技术,用EcoR I从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2-EGFP质粒的EcoR I酶切位点上,经BamH I酶切鉴定出正义和反义表达载体,并进一步测序确认.用脂质体法将肝素酶正义真核表达载体转入人低转移肝癌细胞株MHCC97-L,反义真核表达载体转入人高转移肝癌细胞株MHCC97-H和HCCLM6,24 h后荧光倒置显微镜下检测转染结果.结果经BamH I酶切后,正义质粒形成5.3kb和1.7kb两条DNA片段,而反义重组质粒为6.5kb和O.5kb两条DNA片段,与理论计算值完全一致;测序结果进一步确认了方向的正确性.转染成功的肝癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.结论成功构建了人肝素酶的正、反义真核表达载体,并成功转染人低、高转移肝癌细胞株,为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对肝癌细胞的转移能力的影响奠定了基础.
作者：陈陵；李志宏；杨仕明；李晶晶；蔡永国；房殿春；罗元辉；王东旭
来源：第三军医大学学报 2006 年 28卷 1期
