目的 通过体外实验观察HSP70的小分子干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对宫颈癌HeLa细胞株增殖及凋亡的影响,探讨HSP70在HeLa细胞增殖和凋亡中的功能.方法 针对HSP70基因设计siRNA序列,克隆到空载体pTZU6+1中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析.在脂质体2000的介导下转染HeLa细胞,同时转染空载体为阴性对照及不加任何试剂的空白对照.转染48 h后,应用半定量RT-PCR,Western blot检测HeLa细胞HSP70 mRNA及蛋白的表达情况;MTT法检测HeLa细胞的生长抑制率;AO/EB染色法观察HeLa细胞形态学变化;流式细胞术检测HeLa细胞的凋亡率和细胞周期分布情况.结果 与对照组相比,转染pHSP70-siRNA组HSP70的mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.01),表明Phsp70-siRNA质粒转染能有效降低HSP70的表达;细胞生长抑制率明显增高(P<0.05),且在48 h时细胞抑制率达到最大;在荧光显微镜下观察到HeLa细胞出现凋亡形态;流式细胞术结果显示pHSP70-siRNA组细胞凋亡率显著高于对照组,且G_0/G_1期细胞减少,G_2/M和S期细胞增多.结论 HSP70 siRNA可以有效抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,促进HeLa细胞凋亡;HSP70可能成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点.
作者：韩建红；赖国旗；陈妮；易发平；黄爱龙
来源：第三军医大学学报 2010 年 32卷 4期
