目的 制备可表达人转录因子STAT3的重组腺病毒,检测该基因在胃癌细胞株SGC-7901的表达活性及对其增殖的影响.方法 以人胎盘组织cDNAs为模板通过PCR获得hSTAT3完整阅读框,T/A克隆测序证实后,亚克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,Pme Ⅰ线性化与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在BJ5183细菌同源重组,经Pac Ⅰ线性化后转染293FT细胞包装,同时包装空载体腺病毒,进行病毒滴度测定.取AdV-STAT3、AdV-GFP分别感染SGC-7901细胞,设空白对照,Western blot检测3组细胞STAT3蛋白表达,MTF法检测对细胞增殖的影响.结果 获得hSTAT3完整阅读框,T载体中测序无突变,亚克隆至pAdTrack-CMV,并与pAdEasy-1成功重组后包装AdV-STAT3,测定滴度为2.8×1010pfu/mL,AdV-GFP滴度为3.2×1010pfu/mL.与AdV-GFP组及空白对照组比,Western blot示AdV-STAT3组蛋白明显表达(P＜0.05)；MTT示AdV-1-STAT3组明显促进细胞增殖(P＜0.05).结论 成功制备hSTAT3的重组腺病毒,感染胃癌细胞株SGC-7901后高表达并促进其增殖.
作者：董宗明；赵永亮；余佩武；黄钢
来源：第三军医大学学报 2013 年 35卷 8期
