目的 构建固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SRREBP cleavage activating protein,SCAP)基因干扰(small interfering RNA,siRNA)和过表达重组腺病毒,观察其对ATDC5软骨干细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用pAdEasyTM腺病毒载体系统构建重组腺病毒质粒pAd-SCAPsiRNA和pAdSCAP,在HEK293细胞中分别包装和扩增.RT-PCR和Western blot检测ATDC5细胞中SCAP的表达,流式细胞仪检测SCAP腺病毒对ATDC5细胞周期和凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、p-JNK的表达.结果 成功获腺病毒siSCAP(滴度为2.5 × 1010PFU/mL)和Ad-SCAP(滴度为3.0×10n PFU/mL).RT-PCR和Western blot结果表明:siSCAP和Ad-SCAP能分别有效抑制和增强ATDC5细胞中SCAP的表达.流式细胞仪检测结果表明:与正常组和空病毒组比较,siSCAP腺病毒处理组S期细胞比例升高15.45％和16.07％ (P ＜0.05),Ad-SCAP组比例降低14.27％和13.45％(P＜0.05);siSCAP组细胞凋亡率降低13.10％和11.50％ (P ＜0.05),Ad-SCAP组升高10.51％和10.17％ (P ＜0.05).Western blot检测结果与流式细胞仪检测结果一致.结论 成功构建SCAP腺病毒;敲低SCAP能促进ATDC5细胞增殖并抑制凋亡;过表达SCAP则抑制增殖、促进凋亡.

作者：邓莉；伍志盟；胡勤；郭风劲

来源：第三军医大学学报 2016 年 38卷 14期