目的 通过研究miRNA-145a-5p在肝前体细胞和小鼠感染乙肝病毒X(hepatitis B virus X,HBx)不同时间的变化情况,初步探讨HBx导致肝癌发生的机制.方法 通过慢病毒将HBx基因转染到14-19肝前体细胞中,构建HBx-EGFP-14-19细胞系,并通过肝门静脉将HBx-EGFP-14-19细胞悬液注入KM小鼠体内,建立具有完整免疫系统的HBx小鼠模型,并分别于30、90、180、360 d收集肝脏组织.通过qRT-PCR和Western blot检测HBx在HBx-EGFP-14-19细胞和HBx小鼠中的表达.将miR-145a-5p mimics和inhibitor转染到HBx-EGFP-14-19细胞和饲养180 d HBx小鼠中,qRT-PCR检测miR-145a-5p、c-Myc、Kras、细胞凋亡和细胞周期因子的RNA表达,Western blot检测c-Myc、Kras、细胞凋亡和细胞周期因子的蛋白质表达,CCK-8检测细胞增殖.结果 成功构建能够稳定表达HBx的细胞模型和动物模型.HBx过表达后,miR-145a-5p在HBx-EGFP-14-19细胞和HBx小鼠中的表达下调,而c-Myc和Kras的表达升高.使用miR-145a-5p模拟物(mimic/agomir)可以抑制细胞增殖并下调c-Myc、Kras、Bcl-2、CDK4、Cyclin E、CyclinD1的表达,并上调Bad和Bax的表达,而miR-145a-5p抑制剂(inhibitor/antagomir)与miR-145a-5p模拟物组的结果相反.结论 HBx过表达导致小鼠肝癌发生,其机制可能与HBx调节miR-145

作者：杜彬；周梦瑶；毋楠；张思遥；黄欣；况钦；吴勇；冯涛

来源：第三军医大学学报 2021 年 43卷 18期