目的制备能表达幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的减毒鼠伤寒杆菌,初步确定其是否可用作抗Hp的口服疫苗.方法应用PCR扩增HpUreB基因片段,测序后克隆入原核表达载体PTc01,转化LB5000修饰后再转化SL3261,得到重组的减毒鼠伤寒杆菌SL3261/PTc01-UreB.应用抗Hp菌体蛋白兔血清行Western-blot检测UreB在SL3261中的表达.SL3261/PTc01-UreB在LB培养基上连续传代60代以确定其稳定性.结果从Hp基因组PCR扩增出1700bp片段,测序为UreB基因序列.酶切及PCR鉴定提示PTc01-UreB原核表达载体的构建以及转化减毒鼠伤寒杆菌SL3261是成功的.Western-blot显示SL3261/PTc01-UreB表达约61KD的蛋白,与HpUreB亚单位相符.体外连续培养60代未见PTc01-UreB质粒丢失及其对宿主菌的毒性.结论减毒鼠伤寒杆菌SL3261/PTc01-UreB表达的UreB蛋白具有免疫原性,有望用作抗Hp感染的口服疫苗.
作者：刘晓峰；胡家露；彭道荣；宋保华；季万胜；孙怡群
来源：第四军医大学学报 2000 年 21卷 8期
