目的: 构建并鉴定雌激素反应元件与缺氧反应元件共修饰人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子靶向转录酵母胞嘧啶脱氨酶(FCY1)的复制缺陷型重组腺病毒.方法: 构建由雌激素反应元件(ERE)和缺氧反应元件(HRE)串联重复序列共修饰的hTERT核心启动子,将该启动子序列与酵母胞嘧啶脱氨酶(FCY1)基因插入穿梭质粒,用穿梭质粒与辅助质粒共转染HEK 293细胞,获得重组腺病毒载体Ad-EHhT-FCY1,经 PCR鉴定证实后,采用终点稀释试验测定病毒滴度. 结果: 经24HRE与8ERE共修饰的hTERT核心启动子序列经正反向测序均正确;穿梭质粒和辅助质粒共转染的HEK 293细胞,在转染后7～10 d出现了典型的细胞病变反应(CPE), PCR反应能扩增出122bp的目的片段,终点稀释试验测定得到的病毒滴度为6.2×107 pfu*mL-1. 结论: 成功构建并获得高滴度的ERE与HRE串联重复序列共修饰的hTERT核心启动子引导FCY1转录的复制缺陷型重组腺病毒.
作者：滑玮；辛晓燕；苏明权；李立文
来源：第四军医大学学报 2003 年 24卷 8期
