目的:观察有linker插入的乙肝病毒靶向核糖核酸酶(HBV-TRL)重组腺病毒载体(RAd)对HBV复制的抑制作用.方法:以第四军医大学病原生物学教研室已构建的pc DNA3.1(-)/TRL,TR,TRmut,HBVc和hEDN为基础,分别将目的片段TRL,TR,TRmut,HBVc和hEDN插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒共转染HEK293细胞,重组产生含各目的片段的复制缺陷型腺病毒,即RAd/TRL,TR,HBVc和hEDN,经鉴定、扩增及滴度测定.其中RAd/TRL,TR为实验组,其余重组腺病毒为对照组.将获得的重组腺病毒感染HepG2.2.15细胞后通过间接免疫荧光检测重组腺病毒在细胞中的表达,并应用荧光定量PCR法检测细胞上清中HBVDNA含量.同时,应用MTT比色法检测细胞的代谢活性.结果:成功获得了含TRL,TR,HBVc和hEDN等不同目的片段的复制缺陷型腺病毒载体.RAd/TRL在HepG2.2.15细胞中得到有效表达,并且明显降低了细胞上清HBV-DNA含量,与RAd/TR相比(P=0.0266,P＜0.05),与其他对照组相比(P＜0.01).MTT比色分析表明细胞代谢活性未受到影响(P＞0.05).结论:成功地构建了RAd/TRL,其有效表达成功地抑制了HBV的复制.
作者：宫卫东；易军；赵亚；刘军；丁劲；薛采芳
来源：第四军医大学学报 2005 年 26卷 15期
