目的: 构建人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN)与乙肝病毒核心蛋白(HBVc)之间插入有linker (Gly4Ser)3的融合真核表达载体(该融合蛋白即为靶向核糖核酸酶),以优化分子折叠,并将其应用于抑制HBV复制的体外研究. 方法: 以第四军医大学病原生物学教研室已构建的pcDNA3.1(-)/TR为基础. 首先合成linker序列,经过退火形成双链并克隆入pcDNA3.1(-)/TR生成pcDNA3.1(-)/HBc-linker质粒;随后hEDN片段经PCR扩增后克隆入pcDNA3.1(-)/HBc-linker质粒生成pcDNA3.1(-)/TNL质粒,其中效应分子(hEDN)与靶向分子(HBVc)之间为linker序列. 应用间接免疫荧光法检测pcDNA3.1(-)/TNL在细胞的表达,并应用放免法测定其抗HBV活性. 同时,应用MTT比色法检测细胞的代谢活性. 结果: 成功构建了有linker (Gly4Ser)3介入的hEDN和HBVc真核融合表达载体;并在HepG2.2.15细胞中得到有效表达. 转染质粒pcDNA3.1(-)/TNL与pcDNA3.1(-)/TR相比可明显地降低HepG2.2.15细胞上清中HBsAg的含量(P<0.05). MTT比色分析表明细胞代谢活性未受到影响(P>0.05). 结论: 将linker插入靶向核糖核酸酶中可增强其对HBV复制的抑制效应.
作者：宫卫东；刘军；丁劲；赵亚；李英辉；薛采芳
来源：第四军医大学学报 2003 年 24卷 21期
