目的:扩增细胞静息因子(restin)基因启动子并构建该启动子的荧光报告系统,探讨其对全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)刺激的反应. 方法:①对restin基因上游约2000 bp基因组序列进行计算机生物信息学分析. ②利用PCR技术扩增restin基因上游序列,将其克隆入pG5-luc中,插入荧光素酶报告基因上游,取代5个GAL-4结合位点及腺病毒启动子,构建Rp-luc质粒. ③将构建的质粒转染入HeLa细胞,ATRA诱导检测该质粒中荧光素酶的表达. 结果:酶切及测序结果均证实成功克隆了restin基因上游序列,已将该序列插入到荧光素酶基因的上游;ATRA诱导转入HeLa细胞中的真核表达载体Rp-luc,荧光素酶表达明显增加. 结论:成功构建了含有restin基因启动子序列的荧光报告系统,为进一步研究restin基因功能及其转录调控奠定了基础.
作者：王瑞华；傅海燕；杨国栋；路凡；赵忠良
来源：第四军医大学学报 2006 年 27卷 1期
