目的: 分析人肥大细胞羧基肽酶(hMC-CP)的单克隆抗体(mAb)2A9识别表位所在区域. 方法: 根据肥大细胞hMC-CP的二级结构、亲水性、表面可能性和抗原性指数,对hMC-CP的B细胞表位进行预测. 依据预测结果,采用缺失突变的方法,分别扩增编码hMC-CP N端第1～111(P1P2),97～202(P3P4)和1～202(P1P4)位氨基酸的cDNA,并构建重组原核表达载体pET-44/P1P2、pET-44/P3P4和pET-44/P1P4. 用IPTG诱导表达融合蛋白,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析. 结果: B细胞表位预测结果显示,hMC-CP的N 端第1～202位氨基酸含有多个潜在的B细胞表位. PCR扩增出的3个目的片段,其DNA序列同NCBI公布的序列完全一致. Western blot结果显示: E.coli BL21 (DE3)表达的融合蛋白P3P4和P1P4均与mAb 2A9反应;而融合蛋白P1P2与mAb 2A9不发生反应. 结论: 用多参数综合测评的方法,可获得满意的hMC-CP B细胞表位预测结果,本研究中mAb 2A9识别的表位位于hMC-CP的112-202位氨基酸区域.
作者：周艳春；侯一峰；陈霖霏；郑晓璇；何韶衡
来源：第四军医大学学报 2006 年 27卷 20期
