通过体细胞核移植技术制作了人胰岛素原转基因牛.在CMV启动子指导下以内部核糖体进入位点序列(IRES)连接的新霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因组成了双重标记基因的筛选系统,用于转基因细胞的富集以及细胞和植入前胚胎的筛选.转基因通过电穿孔的方法(900 V/cm,5 ms)转入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,基因转染细胞在添加G418(800 μg/mL)的培养基中培养10天以富集转基因细胞.选择表达绿色荧光蛋白的转基因细胞作为核供体进行体细胞核移植,重构胚经体外培养至囊胚阶段,选择表达绿色荧光蛋白的囊胚进行胚胎移植.为比较基因转染以及供体细胞所处周期对转基因细胞核移植胚胎发育的影响,用作核移植供体的转基因细胞或非转基因细胞先饥饿培养2-4天(0.5
作者：杨东山；郭旭东；海棠；杜晨光；王建国；仓明；刘东军；李喜和；旭日干
来源：动物学研究 2007 年 28卷 4期
