目的 评价巢式PCR联合焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因检测中的敏感与特异性.方法 选取rtM204I(ATT)突变型和rtM204(ATG)未突变型质粒,按照不同比例混合后,采用巢式PCR联合焦磷酸测序法对突变位点进行检测,并与常规PCR焦磷酸测序法进行比较,对两种方法的线性及一致性进行分析；选取不同病毒载量临床标本,采用巢式PCR焦磷酸测序法检测耐药突变位点,并与巢式PCR Sanger测序法进行比较,对两种方法的敏感性及特异性进行分析.结果 常规PCR焦磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果拟合曲线R2＞0.99,P＜0.05,线性模型有显著性意义.分别将常规PCR焦磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果与预测值的差值进行分析,巢式PCR能够较常规PCR更好的反映实际值,在90％比例处优于常规PCR.临床75例患者标本巢式PCR Sanger测序与巢式PCR联合焦磷酸测序结果灵敏性比较提示,Sanger测序的灵敏性为92％,巢式PCR联合焦磷酸测序的灵敏性达到100％,差异有统计学意义(P＜0.01).对于不同病毒拷贝数标本的灵敏性不同,其差异主要表现在低浓度组(HBV DNA≤3log10 copies/ml),Sanger测序的灵敏性为78％,而焦磷酸测序的灵敏性可以达到100％,差异有统计学意义(P＜0.01).阴性对照,两种方法均末检出 HBV病毒,两种方法的特异性均较好.结论 巢式PC
作者：孙树梅；周浩；周彬；胡子有；侯金林；孙剑
来源：南方医科大学学报 2012 年 32卷 5期
