目的:建立用巢式PCR联合焦磷酸测序技术检测HBV核苷类似物耐药基因的检测方法.方法:针对HBV P基因RT区的8个耐药位点,在其上下游分别设计两对特异性引物,构建巢式PCR扩增体系.并初步运用该方法结合焦磷酸测序对223例慢性乙型肝炎(CHB)患者进行8个耐药位点的检测和HBV基因分型.结果:本研究所建立的巢式PCR联合焦磷酸测序检测技术的最低检测下限为2×103copies/ml,在对临床样本的检测中,所有样本均能扩增出阳性条带.192例使用核苷类似物(用药组)CHB患者中,153例(79.7％)为B型HBV,39例(20.3％)为C型HBV.53例(27.6％)产生耐药突变,其中30.1％(16例)发生204位点突变,发生180位点、181位点突变的均为5.6％ (3/53),3.8％ (2/53)发生236位点突变,1.9％ (1/53)发生202位点突变；37.7(20/53)同时发生180/204位点突变,同时发生181/236、204/250位点突变的均为3.8％ (2/53)；同时发生3个位点突变的占7.5％(173/180/240、180/181/204、180/184/204、180/202/204各1例).未用药组31例CHB患者中25例(80.6％)为B型HBV,6例(19.4％)为C型HBV,未发现耐药突变的现象.结论:本检测方法能同时对HBV进行基因分型和多个耐药突变位点进行检测,对抗病毒药物的选用和疗效判断有重要的指导意义,适于临床推广使用.
作者：刘玲；李从荣；郑毅；赵友云
来源：中西医结合肝病杂志 2013 年 23卷 3期
