目的 筛选、鉴定登革2型病毒特异性抗原,为进一步研究其生物学功能奠定基础,并利用纯化抗原建立检测登革2型病毒抗体的ELISA方法.方法 分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对登革病毒1-4型、流行性乙型脑炎及黄热病毒M、E蛋白进行分析,分析登革2型病毒型特异性抗原表位,并参考GenBank中的序列信息进行比对,分析其在不同登革2型病毒株中的保守性.然后选择预测得分值较高的表位,利用pET32a原核表达系统进行原核表达,Western blotting验证其免疫学反应特异性,特异性片段经亲和层析纯化后,包被ELISA微孔板,并对ELISA反应条件进行系统优化.结果 经系统的生物信息学分析,初步预测获得登革2型病毒特异性抗原表位8个,并对其中得分值较高的6段进行了高效表达,经Western blotting分析,获得登革2型病毒特异性抗原片段1段.经纯化后作为检测用抗原,建立了检测登革2型病毒抗体的ELISA方法.初步应用表明,所建立方法具备良好的特异性,可检测1～200倍稀释的患者血清,S/N比值均在10以上.结论 获得登革2型病毒特异性抗原片段1段,并建立检测登革2型病毒抗体的ELISA方法.
作者：任瑞文；唐博恒；张培；胡文龙；洪文艳；刘建伟
来源：南方医科大学学报 2012 年 32卷 11期
