目的 原核表达瘦素受体(OBR)近跨膜区重组融合蛋白并进行SD大鼠免疫实验,观察其对SD大鼠脂肪沉积的影响.方法 设计1对带有BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点特异性引物,扩增OBR胞外近跨膜区基因片段(1705～2364 bp),经酶切后连接到表达载体pRSETA的BamH Ⅰ和HindⅢ两酶切位点之间,构建OBR胞外近跨膜区重组表达质粒并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,SDS-PAGE电泳分析和western blotting鉴定表达产物.随后制备OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白并免疫SD大鼠,观察其对SD大鼠体质量、采食量、体长、Lee's指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积、皮下脂肪沉积的影响.结果 SDS-PAGE电泳分析和Western blotting鉴定结果显示,在IPTG诱导下OBR胞外近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量27 600左右的融合蛋白.对SD大鼠免疫OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白后,体质量、体长、Lee's指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积与对照组无明显差异,而采食量显著增加、皮下脂肪细胞体积减小.结论 成功表达西藏小型猪瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白,免疫SD大鼠可促进采食和抑制皮下脂肪沉积.
作者：刘闻；吴丽红；徐名衬；郭日红；顾为望；施振旦；袁进
来源：南方医科大学学报 2013 年 33卷 6期
