目的：研究蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12（PTPN12）对心脏HERG钾通道电流的调控作用。方法（1）质粒构建和基因转染：PCR技术构建各种质粒，应用脂质体将各种质粒转染HEK293细胞，经G418筛选获得稳定表达的细胞株；（2）应用抗PTPN12抗体进行Western blotting分析检测PTPN12的表达；（3）细胞电生理检测：应用膜片钳技术检测单独表达HERG组（HEK293/HERG细胞）、PTPN12过度表达组（将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERG细胞）、PAO处理组（PTPN12/HERG组基础上加入抑制剂PAO）、herg突变组（将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERGY327A-Y700A-Y845A细胞株）的HERG钾通道电流。结果（1）成功构建herg突变质粒和pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒，并获得稳定表达的细胞株；（2）共转染pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒的HEK293/HERG细胞在荧光显微镜下可观察到PTPN12-RFP在细胞中的表达，Western blotting可检测到PTPN12的表达；（3）PTPN12过度表达组脉冲电流密度明显低于对照组（P<0.01），PAO处理组和herg突变组电流密度明显高于PTPN12/HERG组（P<0.01）。结论PTPN12对心脏HERG钾通道电流具有明显负性调控作用，其可能机制是PTPN12减弱了HERG钾通道酪氨酸磷酸化程度。这一发现有助于更深刻理解HERG钾通道调控机制和长QT

作者：林吉进；刘树楷；郑方芳；马青艳；余宏；任莉；沈心远

来源：南方医科大学学报 2013 年 12期